細胞中的膠原纖維切片是什麼樣子

❶ 如何在組織切片上區分心肌細胞 成纖維細胞

成纖維細胞，也稱為纖維母細胞，是疏鬆結締組織的主要細胞成分，屬於終末分化細胞，這種細胞會製造膠原蛋白等蛋白質。成纖維細胞數目最多，胞體大，為多突的紡錘形或星形的扁平細胞，細胞核呈規則的卵圓形，細胞輪廓不清，具有突起。其形態尚可依細胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發生改變。成纖維細胞胞體較大，胞質弱嗜鹼性，胞核較大呈橢圓形，染色質疏鬆著色淺，核仁明顯。電鏡下，其胞質可見豐富的粗面內質網、游離核糖體和發達的高爾基復合體，表明它具有合成和分泌蛋白質的功能。成纖維細胞尚可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及有機基質。它合成的前膠原蛋白分子經內切酶作用，聚合和重排，可形成與成骨細胞合成分泌的膠原原纖維一樣具有64nm周期橫紋的膠原原纖維，膠原原纖維經互相粘合形成膠原纖維。經檢測，這兩種細胞合成分泌的膠原纖維均是Ⅰ型膠原纖維，在形態和生化結構上完全相同。處於成熟期或稱靜止狀態的纖維細胞，胞體變小，呈長梭形，粗面內質網和高爾基復合體均不發達，被稱為纖維細胞。在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉變為幼稚的成纖維細胞，其功能活動也得以恢復，參與組織損傷後的修復。另外，在結締組織中，仍保留著少量具有分化潛能的間充質細胞，它們在創傷修復等情況下可增殖分化為成纖維細胞。當成纖維細胞癌變時形態會從扁平梭形變成球形。

❷ 纖維細胞的形態

成纖維細胞形態多樣，常見的有梭形、大多角形和扁平星形等，其形態尚可依細胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發生改變。成纖維細胞胞體較大，胞質弱嗜鹼性，胞核較大呈橢圓形，染色質疏鬆著色淺，核仁明顯。電鏡下，其胞質可見豐富的粗面內質網、游離核糖體和發達的高爾基復合體，表明它具有合成和分泌蛋白質的功能。成纖維細胞尚可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及有機基質。它合成的前膠原蛋白分子經內切酶作用，聚合和重排，可形成與成骨細胞合成分泌的膠原原纖維一樣具有64nm(640?)周期橫紋的膠原原纖維，膠原原纖維經互相粘合形成膠原纖維。經檢測，這兩種細胞合成分泌的膠原纖維均是Ⅰ型膠原纖維，在形態和生化結構上完全相同。 處於成熟期或稱靜止狀態的成纖維細胞，胞體變小，呈長梭形，粗面內質網和高爾基復合體均不發達，被稱為纖維細胞。在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉變為幼稚的成纖維細胞，其功能活動也得以恢復，參與組織損傷後的修復。另外，在結締組織中，仍保留著少量具有分化潛能的間充質細胞，它們在創傷修復等情況下可增殖分化為成纖維細胞。

❸ 彈性纖維和膠原纖維是神馬（什麼）東西

彈性纖維是一種纖維，又名黃纖維，含量較膠原纖維少，但分布廣。新鮮狀態下呈黃色，在HE染色切片中，著色淡紅，不易與膠原纖維區分，用醛復紅能將彈性纖維染成紫色，彈性纖維在疏鬆結締組織中略呈黃色，折光性強，富於彈性。

膠原纖維是主要含有膠原蛋白，氨基酸有甘氨酸、脯氨和羥脯氨酸等的纖維組合物。膠原纖維是三種纖維中分布最廣泛，含量最多的一種纖維。廣泛分布於各臟器內，在皮膚、鞏膜和肌腱最為豐富。膠原纖維染色主要用於和肌纖維的鑒別。

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彈性纖維：

一般較膠原纖維細，纖維有分支，排列散亂。其化學成分主要是彈性蛋白，對牽拉作用有更大的耐受力。皮膚和腱的彈性纖維由成纖維細胞產生，在大血管則由平滑肌細胞產生。彈性纖維描述：染成藍紫色，單條分布，有分支，並交織成網。

膠原纖維：

膠原纖維是真皮中的主要成分，占真皮全部纖維質量的95%-98%.新鮮的膠原纖維呈白色，故又稱白纖維。在HE染色標本中，膠原纖維被染成粉紅色，較粗大，直徑0.5-20um,成束分布，排列緊密，並交織成網。

膠原是唯一含羥脯氨酸較多的蛋白質，因此，測定羥脯氨酸的量能確定組織中膠原的含量。膠原蛋白佔全身蛋白質的30%。聚合成膠原的微原纖維的蛋白質分子稱為原膠原分子 。

❹ 膠原纖維的膠原蛋白的染色

膠原纖維在HE染色法被染成粉紅色，除此之外，它還可以用一些陰離子的染料來進行染色，如用淡綠可把它們染為綠色，用甲苯胺藍可將其染為藍色，在網狀纖維染色中，如不加以處理，它又可被染為棕黃色。常用的特殊染色法有Van Gieson.Masson和Mallary等方法。在免疫細胞化學染色中，膠原纖維由於含的負電荷過多，常導致某些非特異性的染色，應特別注意。
（一）.Van Gieson（V.G）染色法
I. 試劑的配製：
weigert氏蘇木素
A液： 蘇木素 1g （haematoxylin）
無水酒精 100ml
B液： 30%三氯化鐵 4ml （ferric chloride）
蒸餾水 95ml
鹽酸 1ml
II．Van Gieson氏液
A液： 酸性品紅 1g（acid fuchsin）
蒸餾水 100ml
B液： 苦味酸飽和水溶液，（1.22%）（picric acid）
注意事項：
1、Weigert氏蘇木素臨用前取A液和B液等份混合，幾個小時內用完，最長不得超過一天。
2、蘇木素配後經二十多天才能成熟，必須提前配製。
3、該液能抵抗弱酸性染液，對已著染的細胞核在酸性染液的作用，不易被脫去顏色，如果不特別深染，則無須分化。
4、Van Gieson氏液取B液9ml，加入A液1ml，即可使用。
操作方法：（後面的各種方法，如沒特別說明，都在室溫下進行）
1、切片脫蠟至水，
2、用Weigert氏蘇木素染20min，
3、水洗，必要時可分化，
4、流水沖洗10min，
5、染Van Gieson氏液1min，
6、用95%酒精快速分化，
7、無水酒精脫水，二甲苯透明，封固。
結果：
膠原纖維：鮮紅色，肌纖維： 黃色，紅細胞： 黃色，細胞核： 藍黑或灰色。
注意事項：
1、該法染完的切片，較易褪色如需照相，應盡早完成。
2、蘇木素染液如為棕色或沉澱，應將其拋棄。
3、分化用的酒精，應使用95%以上的酒精，低濃度的酒精褪色能力強，容易將著染的紅色脫去。
4、切片也可以用天青蘭蘇木素替代Weigert氏蘇木素，染核效果基本一樣。
（二）.Masson氏三色染色法：天青石藍液的配製：天青石藍（Celestin blue B） 1.25g硫酸鐵銨（ferric ammonium sulfate）1.25g
蒸餾水 200ml
甘油（glycerin） 30ml
將前兩者溶於蒸餾水中，然後煮沸，冷卻後過濾，再加入甘油和麝香草酚。
Mayer氏蘇木素的配製蘇木素 0.1g蒸餾水 100ml
鉀明礬（Potassium alum） 5g
檸檬酸（Citric acid） 0.1g
水合氯醛（Chloral hydrate）20mg
配製法：
將蘇木素放入蒸餾水中，用玻棒不停地攪拌直至完全溶解，再依次加入鉀明礬，檸檬酸和水合氯醛，再繼續攪拌，最後加入碘酸鈉，攪拌均勻，即可使用。
麗春紅酸性品紅液的配製：麗春紅（ponceau 2R） 0.7g
酸性品紅（acid fuchsin）0.3g
冰醋酸 1ml
蒸餾水 99ml
操作方法：1
、切片脫蠟至水，2、1%高錳酸鉀氧化切片5min，
3、水洗，草酸漂白1min，
4、水洗，蒸餾水洗，天青石藍染5min水洗，
5、摔去余液不用水洗，滴染Mayer氏蘇木素3-5min，
6、流水沖洗5-10min，
7、麗春紅苦味酸飽和液染5min，
8、1%醋酸水溶液洗，
9、1%磷鉬酸分化切片約5min，
10、蒸餾水洗，
11、1%淡綠或者甲苯胺藍滴染30s，
12、1%醋酸水溶液洗切片，
13、95%酒精分化，無水酒精脫水，
14、二甲苯透明，中性樹膠封固。
結果：膠原纖維呈現綠色或藍色，細胞核呈現灰黑或灰藍色，肌肉和胞質紅細胞呈現紅色。
注意事項：①Masson氏染液配完後保存時間不宜過長，如有可能，每次染色以染配為佳，如何可使著色顏色的鮮艷性。②切片在各級酒精中脫水，時間不宜過長，否則會將著染的顏色脫去。③切片保存所著染的顏色顯長為1—2年以後會隨著時間的延長而逐漸褪去，應予注意。④磷鉬酸和磷鎢酸在染色法中的作用各有不同，磷鉬酸作用於膠原纖維，磷鎢酸作用於纖維膠]質，肌膠質，神經膠質和上皮纖維等。上述兩種試劑的使用，可以促進組織有選擇的染色，它們可以減少背景和核的染色，使背景清晰。⑤如有可能，在組織固定時，用Zenker氏固定液固定，如此對染色效果將更好。
臨床應用：1
、與澱粉樣物的區別： 膠原纖維發生病變如壞死或透明變性時，它與澱粉樣物在HE染色時被染為粉紅色，不好區別。應用V.G染色法，能將膠原纖維染為粉紅色，而澱粉樣物將被染為黃色。2、應用與間胚葉來源腫瘤的區別：
如纖維瘤（肉瘤），平滑肌、橫紋肌瘤（肉瘤），神經纖維瘤（肉瘤）、惡性纖維組織細胞瘤等，由於都含有大量的纖維，HE染色均為紅色。應用Masson氏染色法，可將膠原纖維染色藍色或綠色，肌源性組織被染為紅色。
3、應用與其他慢性炎症的區別。
如慢性闌尾炎，疤痕癒合時，纖維愈復病灶可被染為鮮紅色或藍綠色，SARS病患者癒合後有的肺部可出現疤痕，粘連，此時可顯示藍色或綠色。
可用於鑒定肝硬化及創傷組織的修復程度。肝硬化時的肝組織有許多不同大小的假小葉，用上述方法顯示時，可顯示出不同的組織結構。V.G法可將包繞假小葉的膠原纖維染成紅色，膽汗呈綠色。
小結
膠原纖維在上述的兩種方法中著染不同的顏色，如V.G著染紅色，Masson氏著染藍色或綠色。這主要取決於染料對組織的滲透、吸附、沉澱和反應，而染料分子量的大小是關鍵，分子量小的分子移動迅速，行動快，對組織的滲透性較強，能穿透較為緻密的組織。分子量大的染料分子移動較遲緩，滲透力較弱，可作用於組織強求構較疏鬆的組織，染色時間可適當延長。
在相關的染料中，分子量從小到大依次排列是：苦味酸（黃色）：229.11；桔黃G（黃色）：452；麗春紅（紅色）：480.42；酸性品紅（紅色）：585.53；苯胺藍（藍色）：737.72；亮綠（綠色）：792.72；甲基藍（藍色）>99。
染色是一個較為復雜的化學反應和物理作用的雙重過程，在應用這些方法時，根據不同情況，選擇不同的方法，認真地操作，方能獲得最佳的效果。

❺ 膠原纖維的簡介

膠原纖維（collagenous fiber） 在三種纖維中數量最多，新鮮時呈白色，有光澤，故又名白纖維。在HE染色切片中呈嗜酸性，粗細不等，直徑0.5~10um，呈波浪形，有分支並交織呈網，膠原纖維的生化成分為I型膠原蛋白。膠原蛋白（collagen）由成纖維細胞分泌，於細胞外聚合成膠原原纖維，在再經少量黏合成膠原纖維。電鏡下，膠原原纖維直徑20~100nm，呈明暗交替的周期性橫紋，橫紋周期約64nm,膠原纖維的韌性大，抗拉力強。
膠原纖維：染成粉紅色，束狀，其中的原纖維大多看不清；
兒童時期，骨骼的膠元纖維占的比重較大，成骨細胞製造骨質十分活躍。因此，兒童的骨骼彈性大，不易折斷。

❻ HE染色的實驗原理方法及注意事項

HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理學染色技術。

HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛採用的 常規染色方法。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關鍵。切片質量的好壞，可直接影響疾病診斷的及時與准確性。作為一個合格的實驗技術員，能製作出一張高質量的HE染色切片，是必須掌握的一門重要功課。
HE染色的實驗原理及注意事項
一、細胞核染色原理：
蘇木精為鹼性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
二、細胞漿染色原理：

細胞漿內主要成分是蛋白質，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系，當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或鹼性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時，大於蛋白質的等電點pH值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時胞核也被染色，核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。

三、分化作用：
染色後，用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結構，使組織與色素分離而褪色。經蘇木精染色後，必須用0.5%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去，在進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此，在HE染色中分化是極為關鍵的一步。
四、返藍作用：
分化之後，蘇木精在酸性條件下處於紅色離子狀態，呈紅色，在鹼性條件下處於藍色離子狀態，呈藍色。組織切片經0.5%鹽酸乙醇分化後呈紅色或粉紅色，故分化之後，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化，再用弱鹼性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細胞核呈現藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。
實驗材料
固定液：常用95%乙醇和冰丙酮
蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解於70ml蒸餾水中，然後取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過濾，備用。
伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液，溶於100ml蒸餾水中。
稀鹽酸乙醇溶液：用75%乙醇配製1%鹽酸。
系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。
培養瓶、培養皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。
實驗步驟
樣品制備：對於貼壁生長細胞，胰酶消化，調整細胞濃度約1×105/ml，滴加於蓋玻片上(置於6孔板中)，培養相應時間後，取出細胞爬片，用PBS 洗滌3次。
樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。
染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。
分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數秒，自來水洗滌。
染胞質：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。
吹乾或自然晾幹細胞 爬片後，中性樹膠封片。
若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。
實驗結果及注意事項

** 實驗結果**

細胞核呈藍色，細胞質，肌纖維，膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細菌可呈藍色或紫藍色

注意事項：
1. 染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染蘇木精後，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色後再行分色。
3. 切片經酒精脫水後，入二甲苯時可出現白色不透明狀態，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。

❼ 光學顯微鏡如何區分三種軟骨

透明軟骨、彈性軟骨、纖維軟骨

• 透明軟骨：看不見膠原纖維。因為其中的膠原纖維是II型的，它很細，並且它的折光系數與背景基質一樣

• 彈性軟骨：可以看到彈性纖維（需選用正確的染色方法如EVG染色）

• 纖維軟骨：可以看到很明顯的、很粗的I型膠原纖維
  

光學顯微鏡圖片：

纖維軟骨 圖2

❽ 纖維膠原是什麼

【膠原纖維】
膠原纖維（collagenous
fiber）膠原纖維在疏鬆結締組織中排列成束，彼此交織吻合，纖維束常有分支。纖維具有韌性，抗牽引力強。電鏡觀察，膠原纖維由更細的微原纖維（microfibrils）組成。微原纖維有特殊的橫帶，其周期為64nm。每條微原纖維有一序列的明暗帶。暗帶中比明帶有較多游離的化學根，所以貯留較多的電鏡切片染色劑
膠原纖維：染成粉紅色，束狀，其中的原纖維大多看不清；
膠原纖維主要含有膠原蛋白，氨基酸有甘氨酸、脯氨和羥脯氨酸等。膠原是唯一含羥脯氨酸較多的蛋白質，因此，測定羥脯氨酸的量能確定組織中膠原的含量。膠原蛋白佔全身蛋白質的30％。聚合成膠原的微原纖維的蛋白質分子稱為原膠原分子
。膠原纖維是三種纖維中分布最廣泛，含量最多的一種纖維。廣泛分布於各臟器內。在皮膚、鞏膜和肌腱最為豐富。膠原纖維染色主要用於和肌纖維的鑒別。
兒童時期，骨骼的膠元纖維占的比重較大，成骨細胞製造骨質十分活躍。因此，兒童的骨骼彈性大，不易折斷。
【彈性纖維】
彈性纖維（elastic
fiber）彈性纖維在疏鬆結締組織中略呈黃色，折光性強，富於彈性。一般較膠原纖維細，纖維有分支，排列散亂。其化學成分主要是彈性蛋白（elastin），對牽拉作用有更大的耐受力。皮膚和腱的彈性纖維由成纖維細胞產生，在大血管則由平滑肌細胞產生。
彈性纖維描述：染成藍紫色，單條分布，有分支，並交織成網。
電鏡觀察，彈性纖維包含兩種組分：微原纖維和均質狀物質。微原纖維是由結構糖蛋白排列組成，它圍繞在均質狀物質即彈性蛋白之周圍。

❾ 膠原纖維有沒有分支

有分支並交織成網，膠原纖維的生化成分為I型膠原蛋白。
膠原纖維（collagenous fiber） 在三種纖維中數量最多，新鮮時呈白色，有光澤，故又名白纖維。在HE染色切片中呈嗜酸性，粗細不等，直徑0.5~20um，呈波浪形，有分支並交織成網，膠原纖維的生化成分為I型膠原蛋白。膠原蛋白（collagen）由成纖維細胞分泌，於細胞外聚合成膠原原纖維，在再經少量黏合成膠原纖維。電鏡下，膠原原纖維直徑20~200nm，呈明暗交替的周期性橫紋，橫紋周期約64nm,膠原纖維的韌性大，抗拉力強。